Institut de Chimie & Biologie des Membranes & des Nano-objets • Bordeaux

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New flow cytometry (FCM) approach improves by 50 x the detection of Extracellular Vesicles (EVs) from blood plasma.

a.brisson@cbmn.u-bordeaux.fr

 

Les vésicules extracellulaires (EVs) forment une classe d'objets présents dans le plasma et les liquides biologiques, qui sont considérés refléter l'état physio-pathologique des cellules et des tissus. Les EVs sont l’enjeu d'intenses recherches en raison de leurs multiples rôles et de leurs potentielles applications biomédicales, comme biomarqueurs ou systèmes de délivrance. Cependant, leur faible taille - la plupart d'entre elles mesurent de 50 à 500 nm - rend leur caractérisation et principalement leur quantification très difficiles. Dans notre premier article sur ce sujet (J. Thromb Haemost 2014, 12:614-27), nous avons présenté une description quasi-complète des EVs contenues dans le plasma sanguin de donneurs sains, en combinant la cryo-microscopie électronique (ME) et le marquage à l’aide d’anticorps couplés à des nanoparticules d’or.

 

Nous avons maintenant développé une nouvelle approche de cytométrie en flux (FCM) qui nous permet de détecter environ 50 x plus d'EVS que la méthode conventionnelle de FCM. Dans l'approche conventionnelle de FCM, les EVs sont détectées en fonction de leur intensité de lumière diffusée. Les EVs étant de petits objets à faible indice de réfraction, seule une minorité d’entre elles -au maximum quelques %- sont détectées. Dans l’approche alternative que nous avons développée, les EVs sont détectées sur la base de leur intensité de fluorescence. En premier, comme preuve de principe, nous avons appliqué cette stratégie à la détection des EVs qui exposent la phosphatidylsérine, un lipide procoagulant, à l’aide d'Annexine-5 fluorescente (J Thromb Haemost 2015, 13:237-47). Ensuite, nous avons utilisé cette approche pour quantifier les principales populations d’EVs dans le plasma, d’origines plaquettaires et érythrocytaires (Cytometry A doi: 10.1002/cyto.A.22669). Cette approche est sensible, fiable et simple, rapide. Nous prévoyons que son application au domaine des EVs permettra d’améliorer notre compréhension de leurs rôles physio-pathologiques et stimulera le développement d’approches diagnostiques basées sur les EVs.

 

 

Cet article est publié par N. Arraud, C. Gounou, R. Linares et A. R. Brisson dans J. Thromb Haemost. 2015 février; 13 (2): 237-47, et est disponible gratuitement à l'adresse: http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/jth.12767/abstract

 

 

 

 

Graphes représentant le signal de diffusion de la lumière dans l’axe (FS) et à 90° (SS) pour le même échantillon de plasma.

(A), 450 EVs Anx5-positives sont détectées sur la base de leur signal de diffusion, alors que 22.000 EVs Anx5-positives, soit environ 50 fois plus, sont détectées sur la base de leur signal de fluorescence (B).

 

Forward scatter (FS) vs Side scatter (SS) graphs of the same plasma sample.
Forward scatter (FS) vs Side scatter (SS) graphs of the same plasma sample.
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